蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)

在研究蛋白質(zhì)折疊，蛋白質(zhì)穩(wěn)定性或酶活性時，蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是重要的考慮因素。

用于監(jiān)視二級結(jié)構(gòu)的強(qiáng)大工具是圓二色性（CD），它是左右圓偏振光的吸收差。由于蛋白質(zhì)由手性氨基酸組成，因此它們具有CD活性，并顯示出對CD的二級結(jié)構(gòu)敏感的*CD光譜。該光譜可以提供蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的定性快照，或者可以使用多種算法從遠(yuǎn)紫外CD光譜估算蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)組成，其中一些算法可在Olis GlobalWorks軟件中獲得。

蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)也可用于監(jiān)測蛋白質(zhì)折疊和解折疊。平衡研究包括隨溫度或化學(xué)變性劑增加而變化的CD光譜集合。隨著蛋白質(zhì)的展開，CD光譜反映了這一點。在此變性過程中以單個波長或全光譜掃描擬合數(shù)據(jù)可提供熱力學(xué)信息，例如熔融溫度和展開焓。這兩個參數(shù)都提供了有關(guān)所研究蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的重要信息。

在DSM 17， DSM 20，DSM 1000，和多掃描支持蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)研究。CD 250 Peltier電池座等附件為進(jìn)行這些實驗提供了一種便捷的方法。

停止流

蛋白質(zhì)折疊和展開的動力學(xué)可以通過使用停止流附件進(jìn)行監(jiān)測。可以通過在停止流動反應(yīng)過程中觀察信息波長的CD信號來研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的毫秒變化。GlobalWorks還支持對這些動力學(xué)軌跡進(jìn)行動力學(xué)分析。

酶學(xué)

酶催化的機(jī)制對生物化學(xué)領(lǐng)域的許多研究人員而言很重要。酶活性測量的常用方法包括監(jiān)測酶和底物溶液隨時間變化的吸光度或熒光。隨著反應(yīng)的進(jìn)行，吸光度或熒光的變化報告了產(chǎn)物濃度的增加。

穩(wěn)態(tài)動力學(xué)

穩(wěn)態(tài)動力學(xué)測量涉及在整個測量過程中監(jiān)測酶/底物復(fù)合物在恒定濃度下表現(xiàn)出的吸光度或熒光變化。幾種Olis儀器支持穩(wěn)態(tài)動力學(xué)的測量。這些包括諸如HPDA 8452，Cary 14，Cary 17， DW2，DW2000，DB620和RSM 1000的吸收模型，以及諸如DM 45和DM 245的熒光模型。

穩(wěn)態(tài)前動力學(xué)

穩(wěn)態(tài)前動力學(xué)涉及測量酶/底物復(fù)合物的形成?？梢詫⑼Ｖ沽髁扛郊砑拥酱蠖鄶?shù)此類儀器中。其他配件包括TLC 50，四格珀耳帖（Peltier）炮塔和自動酶測定儀。Olis CLARiTY室為在高散射環(huán)境（例如全細(xì)胞或線粒體懸浮液中）中測量酶動力學(xué)提供了令人興奮的新可能性。

DNA結(jié)構(gòu)/構(gòu)象

DNA的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象是研究DNA與蛋白質(zhì)和其他DNA配體相互作用的重要考慮因素。確定DNA結(jié)構(gòu)和構(gòu)象的技術(shù)包括X射線晶體學(xué)，圓二色性（CD），熒光和紫外可見吸收光譜。除X射線晶體學(xué)外，所有這些技術(shù)均由Olis儀器提供支持。

圓二色性

DNA在200-250 nm區(qū)域表現(xiàn)出*的CD光譜，該光譜對DNA結(jié)構(gòu)特別敏感。當(dāng)添加擾動劑（例如溫度升高或DNA配體）時，CD光譜可用于探測DNA結(jié)構(gòu)。典型的實驗包括在溫度升高或?qū)⑴潴w添加到樣品中的同時收集光譜。

所有Olis CD型號DSM 17，DSM 20，DSM 1000和Protein Machine都支持DNA的CD測量，并且包括諸如CD 250 Peltier溫控細(xì)胞架，用于配體結(jié)合的自動滴定儀和用于動力學(xué)研究的Stopped-Flow等附件。

熒光性

無論是直接來自DNA分子還是來自外部探針，熒光都是闡明DNA結(jié)構(gòu)信息的有價值的技術(shù)。發(fā)射最大值和熒光強(qiáng)度變化揭示了有關(guān)DNA結(jié)構(gòu)完整性的信息。結(jié)合熒光探針在結(jié)合DNA后顯示出極大的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，并且也是有用的DNA結(jié)構(gòu)探針。熒光能量轉(zhuǎn)移（FRET），其中兩個具有重疊發(fā)射和激發(fā)光譜的探針連接到同一DNA分子。從供體染料轉(zhuǎn)移到受體染料的能量是兩者之間距離的函數(shù)。因此，F(xiàn)RET探針可以成為監(jiān)測適當(dāng)標(biāo)記的DNA分子經(jīng)歷的結(jié)構(gòu)變化的有價值的工具。所有Olis Fluorescence型號DM 45，DM 245，SLM 8000，SPF-500，RSM 1000F和Cary熒光系統(tǒng)的理想配置是支持DNA的熒光研究。DSM 17，DSM 20和DSM 1000也可以配置用于CD和熒光研究。

熒光各向異性

熒光各向異性是熒光探針遷移率的量度，也可用于觀察DNA結(jié)構(gòu)和構(gòu)象。在該技術(shù)中，熒光探針被垂直偏振光激發(fā)，發(fā)射的偏振量與熒光壽命期間熒光探針的遷移率有關(guān)?？焖僖苿拥奶结槍?去極化（各向異性為零），而較慢的探針（例如與DNA結(jié)合的探針）將保持部分極化（非零各向異性）。Olis Polarization Toolbox附件為任何Olis熒光計（SLM系列除外）增加了各向異性功能。其他有用的附件包括TLC 50 Peltier池架，4池Peltier炮塔，自動滴定儀和Stopped-Flow。

紫外線吸收

DNA的紫外吸收光譜也揭示了有關(guān)DNA結(jié)構(gòu)的重要信息。盡管由于結(jié)構(gòu)差異而引起的變化通常很小，但是GlobalWorks中的Olis擬合算法甚至可以消除最小的光譜變化。該RSM 1000， OLIS 14/17和HPDA 8452支持的紫外-可見吸收光譜的集合到探針DNA結(jié)構(gòu)。有用的附件包括TLC 40珀耳帖電池固定器和停止流。

線粒體代謝

光譜學(xué)的缺點之一，特別是影響吸收率的是光散射對測量的影響。高度散射的樣品將增加市場上絕大多數(shù)分光光度計的表觀吸收率。儀器無法區(qū)分散射光和吸收光。實際上，該偽影通常用于通過測量600 nm的表觀吸光度來大致定量細(xì)菌細(xì)胞培養(yǎng)物。

渾濁樣品

在1980年代，隨著Aminco DW2和后來的DW2000的推出，部分解決了這個問題。Olis仍然支持這些驚人的光學(xué)平臺。但是，Olis現(xiàn)在通過CLARiTY系列儀器在該設(shè)計上居于**地位，該儀器具有在存在高散射介質(zhì)的情況下記錄真實吸收光譜的能力。Olis CLARiTY系列儀器非常適合監(jiān)測線粒體懸浮液，整個細(xì)胞或其他高度散射環(huán)境中的吸光度變化。

CLARiTY系列產(chǎn)品包括RSM 1000，DM 245和DB 620光學(xué)平臺。RSM 1000配置允許收集快速掃描，通常配置為每秒最多測量100次掃描。DM 245和DB 620配置為隨時間進(jìn)行單個波長測量或用于常規(guī)吸光度掃描。CLARiTY室包括磁力攪拌和25至80 C temperature的溫度控制。常用附件包括TLC 50（用于RSM 1000），StepDisk（用于RSM 1000），Twin Peltier（用于DW2 / 2000）和熒光模塊（用于DW2 / 2000）。

化學(xué)動力學(xué)

反應(yīng)動力學(xué)是實驗室和教室化學(xué)研究的重要組成部分。動力學(xué)分析的概念是許多本科化學(xué)課程的基礎(chǔ)，也是許多研究項目的基礎(chǔ)。Olis支持通過光譜學(xué)在紫外線，可見光或近紅外光譜區(qū)域內(nèi)以微秒到小時的時間范圍監(jiān)視反應(yīng)。動力學(xué)反應(yīng)可以通過多種方法觸發(fā)，包括手動混合，停止流混合或快速光解。但是，可以由TTL信號啟動的任何觸發(fā)器都可以集成到Olis系統(tǒng)中。

吸光度和熒光

強(qiáng)大的Olis動力學(xué)系統(tǒng)是RSM 1000，可以輕松配置以用于從深紫外到近紅外的任何波長范圍。其獲得的ScanDisk技術(shù)支持每秒最多收集1000次光譜掃描。為了以更適中的速率吸收光譜，HPDA 8452以高達(dá)10次掃描/秒的速度收集光譜掃描。RSM 1000，DB 620或HPDA 8452可用于單波長動態(tài)波長。

的DM 45，DM 245，RSM 1000F，和SLM系列熒光計提供的能力來監(jiān)控?zé)晒夥磻?yīng)為好。

停流，閃光燈，LED，Peltier TLC 45，Peltier TLC 50和電磁攪拌器是這些測量的常用附件。